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被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結合的標記抗原的量就越少，有色產物就減少，這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結構不同，還需應用不同的結合方法。此外，試驗中應用酶標抗原的量較多。5.阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒） 本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬病（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測法為例介紹其操作程序： 　?、?100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 　?、?用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　　④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 　?、?用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測儀測定OD值。 　　本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。